Jak Rozpoznać Prawdziwy Certyfikat HPLC i Badania MS?
Wielu dystrybutorów posługuje się podrobionymi lub generycznymi certyfikatami analizy (CoA). Wyjaśniamy krok po kroku zasady chromatografii RP-HPLC, rolę spektrometrii mas oraz parametry świadczące o autentyczności badań.
Wzorcowy Chromatogram RP-HPLC Czystości Analitycznej
Kolumna C18, 5µm, 100Å · Gradient ACN w 0.1% TFA · Detekcja UV przy λ = 214 nm
1. RP-HPLC: Oznaczanie Czystości Piku
Chromatografia z odwróconą fazą (RP-HPLC) opiera się na rozdziale składników próbki na podstawie ich hydrofobowości. Kluczowa jest detekcja przy długości fali λ = 214 nm. Jest to pasmo absorpcyjne wiązań peptydowych (-CONH-). Detekcja przy λ = 254 nm lub 280 nm (absorpcja pierścieni aromatycznych) może drastycznie zafałszować wynik, ponieważ zanieczyszczenia nieposiadające reszt tryptofanu czy tyrozyny byłyby niewidoczne dla detektora.
2. Spektrometria Mas (ESI-MS / MALDI-TOF): Weryfikacja Tożsamości
HPLC określa, jaki procent powierzchni pod krzywą zajmuje pik dominujący, ale nie mówi, co to za substancja. Pik o czystości 99% może należeć do zupełnie innego peptydu. Dopiero spektrometria mas (MS) potwierdza tożsamość poprzez pomiar stosunku masy do ładunku (m/z). Błąd pomiaru w stosunku do masy teoretycznej musi wynosić poniżej ± 0.5 Da.
3. Elementy Autentycznego Certyfikatu Analitycznego (CoA)
- Numer partii (Batch/Lot number): Identyczny z nadrukiem na fiolce liofilizatu.
- Warunki chromatograficzne: Podany dokładny typ kolumny (np. Kromasil C18, 4.6x250 mm), skład fazy ruchomej (np. ACN / 0.1% TFA) oraz gradient.
- Tabela integracji pików: Podana powierzchnia każdego piku bocznego z czasem retencji.
- Spektrogram masowy: Widoczne piki jonów molekularnych [M+H]+, [M+2H]2+ potwierdzające masę.
Materiały o charakterze analityczno-edukacyjnym. Portal PepInfo.pl nie jest laboratorium komercyjnym i nie wykonuje odpłatnych analiz próbek.